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技术支持

培养基如何消除组织培养的污染?
发布时间:2019-07-11   点击次数:70次

培养基一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640做悬浮细胞培养,各种目的无血清培养的是AIM V培养基(SFM)。在开始进行新的细胞培养时,如何消除组织培养的污染?可以参考下表所列的条件:
如何消除组织培养的污染?

当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。

高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

① 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。

② 分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

③ 每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。

④ 确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。

⑤ 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

⑥ 重复步骤4。

⑦ 在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。

培养基操作建议:
1、商品化的应根据使用说明书上的要求进行储存。标签上应标有批号,生产日期、有效期及有关特性。所采用的保藏和运输条件应使限度失去水分并提供机械保护。
2、配制好之后应保存在2~25℃避光的环境。若保存于非密闭容器中,一般在三周内使用;若保存于密闭容器中,一般在一年内使用,琼脂培养基不得在0℃或0℃以下存放,防止冷冻破坏凝胶特性。若要长期保存,琼脂平板应密闭包装或置于密闭容器中以防止水分流失。
3、保存于密闭容器中,可防止水分流失以延长保存时间。
4、灭菌后应立即取出,不得储藏在高压菌器中,避免影响质量。制备好之后应保存在2~25℃、避光的环境。
5、固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采用流通蒸汽进行,只允许一次,融化后应放在45~50℃的水浴中,不得超过8小时。

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